液相色譜柱使用前應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，注意色譜柱的使用溫度、pH值范圍、所用緩沖鹽的種類等。

1、新色譜柱在使用前，先用純甲醇在254nm波長下處理，直至基線沖平為止，然后用甲醇:水=10:90（V:V）沖柱子，直到基線沖平為止。

2、一般反相色譜柱使用方法：先以甲醇:水=10:90（V:V）沖洗柱子45分鐘，再換上流動相平衡45分鐘，根據(jù)基線情況進(jìn)樣（基線漂移不符合要求時應(yīng)延長平衡時間），分析樣品完畢，流動相繼續(xù)20分鐘（或20分鐘又上），使用緩沖鹽（或含鹽）作流動相，應(yīng)用不含緩沖鹽（作同量的水代替緩沖鹽）的流動相沖洗色譜柱，使色譜柱中的鹽*洗掉。再換上甲醇:水=10:90（V:V）沖洗柱子45～60分鐘，然后再用100%甲醇沖40分鐘，再放置保存。

注意：不能用純有機(jī)溶劑直接沖洗色譜柱，防止鹽析出，堵塞色譜柱或儀器管路，而使色譜柱報(bào)廢。

3、一般正相色譜柱使用方法：zui常用的流動相是水和乙腈混合物。先用乙腈:水=85:15(V:V)沖洗柱子45分鐘，再換上流動相平衡45分鐘，根據(jù)基線情況進(jìn)樣（基線漂移嚴(yán)重應(yīng)延長平衡時間），分析樣品完畢，流動相繼續(xù)20分鐘（或20分鐘以上），再換上乙腈:水=85:15（V:V）沖洗柱子45～60分鐘，放置保存。

4、特殊色譜柱（手性柱或異構(gòu)體柱子）使用時，除仔細(xì)閱讀說明書外，還需向所購買單位詳細(xì)咨詢使用方法及注意事項(xiàng)，確認(rèn)無誤后，方可使用。

5、在替換溶劑時，應(yīng)確保系統(tǒng)和色譜柱中的溶劑與新溶劑互溶。如果兩種溶劑互溶性和物理性質(zhì)未知，可以把兩種溶劑倒在燒杯中觀察，以避免直接進(jìn)入HPLC系統(tǒng)可能出現(xiàn)不互溶的問題。

6、對于反相柱，長期保存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。正相柱可以儲存于嚴(yán)格脫水后的純正已烷中，儲存的溫度按照說明書要求儲存。

7、柱子在裝卸、更換時，動作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動，以免柱床產(chǎn)生空隙。

8、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會影響柱內(nèi)填料狀態(tài)，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行。

9、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜柱中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/div>