色譜標(biāo)準(zhǔn)品不出峰或者出兩個(gè)峰是怎么回事
情況一:HPLC測定槲皮素和奈酚時(shí),按照文獻(xiàn)將色譜條件設(shè)定為檢測波長360nm,柱溫30度,流速1ml/min,流動(dòng)相是甲醇-0.2%磷酸溶液(45:55).標(biāo)準(zhǔn)品用液相色譜甲醇超聲溶解定容,微孔濾膜過濾后注入液相色譜儀,但是就是看不見峰,文獻(xiàn)上槲皮素在該條件下是10.3mim出峰,奈酚在系統(tǒng)條件下13.67min出峰.把測定時(shí)間設(shè)定為30min,但在30min中內(nèi)
色譜標(biāo)準(zhǔn)品沒有任何峰出現(xiàn)。
情況二:用的衍生試劑是異硫氰酸苯酯(PITC),流動(dòng)相a是醋酸鈉溶液,流動(dòng)相b是乙腈溶液。檢測條件:色譜柱:C18-AQ柱,柱溫25℃;流動(dòng)相:甲醇:水=5:95;流速:1ml/min;紫外檢測器,檢測波長:280nm,進(jìn)樣量:10ul。做液相色譜谷氨酸色譜標(biāo)準(zhǔn)品總是出兩個(gè)分不開的峰是什么原因?
色譜標(biāo)準(zhǔn)品不出峰或者出兩個(gè)峰分析原因:
1、不同的色譜柱,保留差異會很大。建議是:將甲醇的比例增大,比如70:30,再根據(jù)主峰的保留時(shí)間調(diào)整比例,直到分離結(jié)果滿意。
2、標(biāo)準(zhǔn)品選用的溶劑溶解不適合,或者溶劑對樣品溶解過程中出現(xiàn)異構(gòu)化。
3、如果用到衍生劑可能是因?yàn)檠苌鷦┭苌粔?,或者衍生劑降解或者變質(zhì)。
4、使用的檢測器不適合于分析。
5、有可能是色譜柱污染,你可以再生柱子;
6、可以適當(dāng)調(diào)整流動(dòng)相的pH;
7、提高色譜柱柱溫;
8、
色譜標(biāo)準(zhǔn)品采用梯度洗脫方式。